O metilfolato é a forma ativa do ácido fólico, isto é, não precisa ser metabolizada pelo organismo. Ele participa da síntese de purinas e pirimidinas, compostos utilizados na composição do DNA e, portanto, da produção de células para todo o organismo. Neste processo, atua em conjunto com a Vitamina B12 ou cobalamina.
O principal papel do metilfolato está no metabolismo de aminoácidos e na síntese de DNA, que é fundamental para o desenvolvimento embrionário, por ser um momento de alta replicação celular. Também é essencial para a maturação das hemácias e leucócitos na medula óssea e para o fortalecimento do sistema imunológico, pelo estímulo à produção de células imunológicas e anticorpos.